پشتیبانی فنی

همکاران گرامی

شرکت تولیدی تحقیقاتی پیشتاز طب پیشرو در تولید کیت های الایزا با دانش فنی 100% داخلی در صدد است تا با ارائه پشتیبانی بعد از فروش در راستای برقراری ارتباطی تنگاتنگ با مراکز و آزمایشگاه های تشخیص پزشکی و تحقیقاتی موجب ارتقاء کیفیت و خدمات این شرکت گردد. در صورتی که نکات ذیل پاسخگوی شما نبود لطفاً با آدرس پست الکترونیکی info@pishtazteb.com یا شماره تلفن دفتر مرکزی: 42197000 یا تلفن پاسخگویی به مشکلات فنی الایزا : 42197777، تلفن پاسخگویی به مشکلات فنی بیوشیمی : 42197888 و یا دورنگار: 42197007 تماس حاصل نموده تا همکاران ما در قسمت فنی پاسخگوی مشکلات شما باشند. نکات ذکر شده در این صفحه موارد رایجی از مشکلات احتمالی در تست های الایزا و نحوه حل این مشکلات می باشند.

مشکلات احتمالی در تست های الایزا

مقادیر بالای کنترل منفی و یا بک گراند بالا
مقادیر پائین کنترل مثبت یا ابزوربنس های پائین
تمام پلیت دارای OD مثبت است یا در تمام خانه های پلیت رنگ ظاهر شده است
واکنش های مثبت کاذب
قدرت تکرار پذیری ضعیف یا دوپلیکیت ناهمخوان
حساسیت ضعیف
ابزوربنس کالیبراتورها (استانداردها) بالاست
نمونه، ابزوربنس خارج از رنج کالیبراتورها دارد
کلیه ابزوربنس ها پائین است
کنترل از رنج خارج است
استریپ ها از نگهدارنده آن ها در پلیت خارج می شوند
استریپ ها در هلدر فیت نمی شوند
کروموژن آبی رنگ شده است
بعد از ترکیب کروموژن و سوبسترا محلول آبی رنگ می شود
زرد رنگ شدن( Stop Solution) یا محلول متوقف کننده واکنش
رسوب و ذرات سیاه در چاهک ها قبل از خواندن ابزوربنس
حتی پس از 30 دقیقه انکوباسیون سوبسترا رنگی ظاهر نمی شود
رنگزایی با سرعت زیادی حادث می شود

شستشو (Washing)   

عملیات شستشو جهت جدا کردن ترکیبات باند شده به کف چاهک ها از آنهائیکه متصل نشده اند صورت می گیرد این عمل با خالی کردن مایع داخل چاهک ها و ریختن مایع شستشو به داخل آنها انجام می شود که معمولا ً حداقل باید سه بار این عمل را تکرار کرد محلولی که جهت شستشو استفاده می گردد باید دارای شرایط خاصی باشد مثلاً باید شرایط ایزوتونیکی ایجاد نماید تا بر پیوند آنتی ژن و آنتی بادی اثرسوء نداشته باشد یکی از بهترین محلول ها که بیشترین استفاده را جهت شستشو در الایزا دارد محلول PBS می باشد (آب معمولی به علت اینکه دارای شرایط یکسان و استیبل در مشخصاتی چون PH و مولاریته و... نمی باشد مایع چندان خوبی جهت شستشو نیست) گاهی در برخی از محلول های شستشو از برخی دترجنت ها استفاده می گردد(مانندTween) تا قدرت شستشوی محلول افزایش یابد. باید توجه داشت که در صورت استفاده از دترجنت ها د ر محلول شستشو باید دقت شود که این دترجنت اثر سوئی بر روی آنتی ژن ها نداشته باشد(مانند اثر دناتوراسیون) در ضمن در موارد استفاده از دترجنت در محلول شستشو احتمال بوجود آمدن حباب در هنگام ریختن محلول شستشو در چاهک ها وجود دارد که این حباب ها می توانند از تماس محلول با کف چاهک ممانعت کرده و در نتیجه عملیات شستشو را درآن نواحی مختل کنند لذا باید از تشکیل حباب در چاهک ها در هنگام شستشو بشدت اجتناب ورزید.

شستشوی دستی (Manual Washing)   

در شستشوی دستی پلیت مهمترین نکته این است که تمام نقاط چاهک ها در تماس با محلول شستشو قرار گیرند و نباید هیچ گونه حباب هوائی ایجاد شود

شستشو با دستگاه های شستشوی پلیت یا استریپ

در این دستگاه ها سیکل های متعدد شستشو قابل برنامه ریزی است و این دستگاه ها باید بصورت روتین مورد معاینه قرار گیرند تا کارکرد آنها دائماً مورد تائید واقع شود زیرا ممکن است اشکالات خاصی که در آنها ایجاد می شود مانع شستشوی صحیح گردند(مانند مسدود شدن کانال های شستشو)   

 

نکاتی مهم در شستشو  

- مراحل تهیه محلول شستشو را به دقت انجام دهید.

- صحت عمل دستگاه شستشو را روزانه و به صورت روتین چک کنید.

- از طراز بودن سطح پلیت در هنگام شستشو اطمینان حاصل کنید.

- مطمئن شوید که چاهک ها در هنگام شستشو کاملاً پر می شوند(در هنگام پر شدن چاهک ها سطح گنبدی مایع قابل مشاهده می باشد)

- ازخروج باقی مانده های کنژوگه در هنگام شستشو اطمینان حاصل کنید.

- در هنگام شستشو از سر ریز شدن محلول شستشو و ورود آن به چاهک های مجاور بپرهیزید.

- در دستگاه واشر فشار شستشو را کاهش داده و از فشارهای بالا استفاده نکنید.

- در هنگام شستشو باید طبق دستور کیت به تعداد دفعاتی که ذکر شده عملیات شستشو را انجام داد.

- بین هر مرحله شستشو پس از ریختن محلول شستشو 20 ثانیه وقفه ایجاد کنید.

- در هنگام خالی کردن و یا آسپیره کردن محلول شستشو اطمینان حاصل کنید که تمامی آن خارج میشود.

- پس از اتمام مراحل شستشو با برگرداندن پلیت بر روی کاغذ نم گیر ذرات باقی مانده را خارج کنید.     

نکاتی مهم در سمپلینگ   

- سمپلرها را طبق دستور سازنده آنها مرتباً کالیبره کنید.

- از تماس نوک سمپلر از دیواره یک چاهک به چاهک دیگر بپرهیزید.

- از پاشیده شدن نمونه ها وسایر محلول ها به اطراف و سایر چاهک ها بپرهیزید.

- از خارج کردن محلول های باقیمانده در نوک سمپلر با فوت کردن بپرهیزید.

- برای هر نمونه یا محلول از نوک سمپلر جدید استفاده کنید.

- لوله سمپلر را جهت وجود قطرات و یا مواد خشک شده چک کرده و در صورت وجود آنها را پاک کنید.

- از فیت و محکم شدن نوک سمپلرها بر سر سمپلر اطمینان حاصل کنید.    

نکاتی مهم درمورد میکروپلیت   

- قبل از باز کردن درب کیسه حاوی میکروپلیت آن را به دمای اتاق برسانید.

- بعد از افزودن سوبسترا پلیت را در جای تاریک قرار دهید.

- در هنگام خالی کردن پلیت باید دو طرف آن را طوری فشار دهید که استریپ ها نتوانند خارج شوند.

- اگر استریپ ها در هلدر خوب فیت نمی شوند ابتدا آنها را 180 درجه چرخانده و جا بزنید و اگر باز هم فیت نشدند از هلدر مناسب استفاده کنید.

- استریپ های استفاده نشده را همراه با نم گیر به داخل کیسه مخصوص برگردانده و در آن را خوب ببندید.

- در زمان باز کردن درب پلیت در بار اول تاریخ را روی کیسه پلیت یادداشت کنید.

- اثر انگشت ها را توسط محلول شستشو از روی پلیت پاک کنید و آن را خشک کنید.

- توجه کنید که در هنگام انجام مراحل تست مانند شستشو، ریختن محلول ها در چاهک ها و قرائت جذب نوری چاهک ها در جای خود باشند.

- قبل از قرائت جذب نوری زیر پلیت را با دستمال مخصوص بدون ذرات پخش شونده پاک کنید.

- در خلال انجام تست نباید اجازه داد که کف چاهک خشک شوند.  

نکاتی مهم در مورد آماده سازی سوبسترا   

- از محلول های تازه کروموژن و سوبسترا(سوبسترا A وسوبسترای B) استفاده کنید.

- طرز تهیه محلول سوبسترای آماده کار را به دقت مانند دستور کیت اجرا کنید.

- دمای محلول در نتیجه تست بسیارمهم است زیرا در تولید رنگ تاثیر بسزائی دارد.

- برای نگهداری محلول سوبسترای تازه را با محلول قدیمی در یک ظرف مخلوط نکنید.

- برای استفاده مجدد از ظروف سوبستراهای کهنه آن ها را با محلول اسید سولفوریک شسته چند بار با آب مقطر شستشو دهید.    

نکاتی مهم در مورد آنزیم کنژوگه   

- کنژوگه را در دمای ذکر شده در کیت نگهداری کنید.

- کنژوگه رقیق شده را برای مدت طولانی جهت انجام تست های دیگر نگهداری نکنید و همیشه به اندازه نیاز برای تستی که انجام می دهید محلول کنژوگه را آماده کنید.

- هرگز برای مدت طولانی محلول کنژوگه را در روی میز کار باقی نگذارید.    

نکاتی مهم در مورد افزودن نمونه   

گاهی برخی اشکالات در سمپلینگ نمونه باعث ایجاد نتیجه ناصحیح می شود که عبارتند از :

- قرار نگرفتن نمونه در مرکز کف چاهک یا بافر موجود در چاهک و تماس آن با دیواره های چاهک ها.

- ایجاد کف و حباب در هنگام افزودن نمونه.     

نکاتی در مورد محلو ل متوقف کننده واکنش (Stop Solution)  

محلول متوقف کننده واکنش جهت جلوگیری از واکنش بیشتر آنزیم در الایزا افزوده می شود عمل متوقف سازی واکنش معمولاً در زمانی صورت می گیرد که عملیات تولید محصول از واکنش آنزیم و سوبسترا هنوز در فاز خطی(Linear) می باشد. اسیدها و بازهای قوی بامولاریته بالا با دناتوره کردن ساختمان آنزیم فعالیت آن را متوقف می سازند برخی محلول های استاپینگ به صورت اختصاصی بر روی آنزیم های خاص اثرمی گذارند( Enzyme - Specific)، مثلاً سدیم آزاید مهار کننده آنزیم HRP می باشد و EDTA با شلاته کردن یون آهن کو- فاکتور آنزیم آلکالن فسفاتاز این آنزیم را مهار می کند. در بسیاری از تست های الایزا پس از افزودن محلو ل متوقف کننده واکنش طیف جذبی محصول تغییر می کند مثلاً رنگ محلول داخل چاهک از آبی به زرد تبدیل می شود که ماکزیمم جذب حاصل معمولاً در 450 ناتومتر و یا 492 نانومتر خواهد بود

نکاتی مهم در مورد دما 

- تقریباً نیم ساعت قبل از شروع تست تمامی اجزای کیت را به دمای اتاق ( 20 تا 25 درجه سانتی گراد ) برسانید.

- دمای کلیه انکوباتورها را چک و تنظیم نمائید. بیاد داشته باشید که دمای پائین تر از حد لازم می تواند باعث کاهش جذب نوری شده و دمای بالاتر از آن می تواند باعث افزایش جذب نوری شود، در ضمن تبخیر مایع در چاهک ها می تواند باعث اثر لبه ای (Edge Effect) گردد که در نتیجه آزمایش اختلا ل ایجاد می کند.

- دمای مناسب برای انکوباسیون در دمای اتاق 20 تا 25 درجه سانتی گراد می باشد بنا براین دمای اتاق را با استفاده از ترمومتر حساس و کالیبره شده اندازه گیری کرده و تنظیم نمائید.

- دستیابی به دمای کاملاً مناسب برای هر تست از ضروریات است بنابراین:

1- کالیبراسیون تایمرها را بررسی کنید و در صورت عدم دقت کافی آنها را تنظیم و یا تعمیر نمائید.

2- زمان انکوباسیون ها را ثبت نمائید.

3- پس از افزودن محلول متوقف کننده واکنش هر چه سریعتر جذب نوری ها را قرائت نمائید.

نکاتی مهم درمورد شیکینگ و روتیشن 

- شیکینگ و روتیشن باعث می شود که از یک طرف مواد در حال واکنش خوب با هم مخلوط شوند و از طرف دیگر مواد موجود در مایع داخل چاهک ها به صورت پیوسته در تماس با فاز جامد قرار گیرند.

- با عمل شیکینگ و روتیشن می توان انرژی کینتیک سیستم را فراهم نمود که دراین صورت واکنش آنتی ژن و آنتی بادی افزایش پیدا کرده و گاهاً نیاز به انکوباسیون در دمای بالاتر جبران خواهد شد.